Hotstart Taq DNA polimeraza
Hot Start Taq DNA polimeraza (modifikacija antitijela) je termostabilna DNA polimeraza s vrućim startom iz Thermus aquaticus YT-1， koja posjeduje aktivnost polimeraze 5′→3′ i aktivnost endonukleaze 5´ režnja.Taq DNA polimeraza s vrućim startom je Taq DNA polimeraza koja je modificirana termolabilnim Taq protutijelima.Modifikacija protutijela povećala je specifičnost, osjetljivost i prinos PCR-a.
Komponente
| komponenta | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq pufer | 4×1 mL | 4×10 mL | 4×50 ml | 5×400 ml |
| Hot Start Taq DNA polimeraza (modificirano antitijelo) (5 U/μL) | 0,1 mL | 1 mL | 5 mL | 10×5 mL |
Prijave
10 mM Tris-HCl (pH 7,4 na 25°C), 100 mM KCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM ditiotreitol, 0,5% Tween20, 0,5% IGEPALCA-630 i 50% glicerol.
Uvjet skladištenja
Prijevoz ispod 0°C i skladištenje na -25°C~-15°C.
Definicija jedinice
Jedna jedinica definirana je kao količina enzima koja inkorporira 15 nmol dNTP-a u materijal netopljiv u kiselini u 30 minuta na 75°C.
Kontrola kvalitete
1.Endonukleazna aktivnost:Inkubacija 20 U enzima s 4 μg pUC19 DNA tijekom 4 sata na 37 ℃ nije rezultirala mjerljivom razgradnjom DNA što je utvrđeno gel elektroforezom.
2.5 kb Lambda PCR:25 ciklusa PCR amplifikacije 5 ng Lambda DNA s 1,25 jedinica Taq DNA polimeraze u prisutnosti 200 µM dNTP-a i 0,2 µM početnica rezultira očekivanim produktom od 5 kb.
3.Aktivnost egzonukleaze:Inkubacija 50 µl reakcije koja sadrži najmanje 12,5 U Taq DNA polimeraze s 10 nmol 5´-FAM oligonukleotida tijekom 30 minuta na 37 ℃ ne daje vidljivu razgradnju.
4.Aktivnost RNaze:Inkubacija 10 µL reakcije koja sadrži 20 U enzima s 1 µg RNA transkripata tijekom 2 sata na 37°C nije rezultirala detektabilnom razgradnjom RNA kako je utvrđeno elektroforezom u gelu.
5.Inaktivacija toplinom:Ne.
Reakcijski sustav
| Komponente | Volumen |
| Predložak DNKa | neobavezan |
| 10 μM Forward Primer | 0,5 μL |
| 10 μM reverzni primer | 0,5 μL |
| dNTP mješavina (10 mM svaki) | 0,5 μL |
| 5×HC Taq pufer | 5 μL |
| Taq DNA polimerazab(5U/μL) | 0,125 μL |
| Voda bez nukleaza | Do 25 μL |
Bilješke:
1) a.
| DNK | Iznos |
| Genomski | 1 ng-1 μg |
| Plazmid ili virus | 1 str.-1 ng |
2) b.Optimalna koncentracija Taq DNA polimeraze može se kretati od 5-50 jedinica/mL (0,1-0,5 jedinica/25 µL reakcija) u specijaliziranim primjenama.
Protokol toplinskog ciklusa
PCR
| Korak | Temperatura(°C) | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna denaturacijaa | 95 ℃ | 1-3 min | - |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 ciklusa |
| Žarenjeb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Proširenje | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Završni nastavak | 68 ℃ | 5 minuta | - |
Bilješke:
1) Početna denaturacija od 1 minute na 95°C dovoljna je za većinu pojačanja.Za teške šablone preporučuje se duža denaturacija od 2-3 minute na 95°C.Uz PCR kolonije, preporučuje se početna denaturacija od 5 minuta na 95°C.
2) Korak žarenja je obično 15-60 s.Temperatura žarenja temelji se na Tm para primera i obično je 45-68 ℃.
