DNaza I (bez Rnaze) (5u/ul)
Kataloški broj: HC4007A
DNaza I (deoksiribonukleaza I) je endodeoksiribonukleaza koja može probaviti jednolančanu ili dvolančanu DNK.Prepoznaje i cijepa fosfodiesterske veze kako bi proizveo monodeoksinukleotide ili jednolančane ili dvolančane oligodeoksinukleotide s fosfatnom skupinom na 5'-terminalu i hidroksilnom na 3'-terminalu.Aktivnost DNaze I ovisi o Ca2+a mogu se aktivirati dvovalentnim metalnim ionima poput Mn2+i Zn2+.5 mM Ca2+štiti enzim od hidrolize.U prisustvu Mg2+, enzim bi mogao nasumično prepoznati i odcijepiti bilo koje mjesto na bilo kojem lancu DNK.U nazočnosti Mn2+, dvostruki lanci DNA mogu se istovremeno prepoznati i cijepati na gotovo istom mjestu kako bi se formirali fragmenti DNA s ravnim krajevima ili fragmenti DNA s ljepljivim krajevima s 1-2 nukleotida koji strše.
Komponente
| Ime | 0,1 KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaza I, bez RNaze | 20 μL | 200 μL | 1 mL | 10 mL |
| 10×DNase I pufer | 1 mL | 1 mL | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Uvjeti skladištenja
-25℃~-15℃ za skladištenje;Prijevoz pod ledom.
upute
1. Pripremite reakcijsku otopinu u epruveti bez RNaze prema dolje navedenim omjerima:
| komponenta | Volumen |
| RNA | X µg |
| 10 × DNaza I pufer | 1 μL |
| DNaza I, bez RNaze (5U/μL) | 1 U po µg RNA① |
| ddH2O | Do 10μL |
Napomena: ①Izračunajte volumen DNaze I koji je potrebno dodati na temelju količine RNA.
2. 37 ℃ 15 minuta;
3. Dodajte 0,5 M EDTA do konačne koncentracije od 2,5 mM ~ 5 mM i zagrijavajte na 65 ℃ 10 minuta kako biste zaustavili reakciju.Uzorak se može izravno koristiti za sljedeću reakciju kao što je reverzna transkripcijaeksperiment.
Definicija jedinice
Jedna jedinica je definirana kao količina enzima koja će potpuno razgraditi 1 µg pBR322DNK za 10 minuta na 37 ℃.
Kontrola kvalitete
RNaza:5U DNaze I s 1,6 µg MS2 RNA tijekom 4 sata na 37 ℃ ne dovodi do razgradnje kaoodređuje se elektroforezom u agaroznom gelu.
Bilješke
1. Molimo pripremite 0,5MEDTA sami.
2. Koristite 1U DNaze I po µg RNA.Međutim, ako je RNA manja od 1µg, koristite 1U DNazu I.
3. Stavite enzim na led tijekom rada.
