Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kataloški broj: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG specijalizirani je reagens dizajniran za kvalitativne i kvantitativne reakcije PCR u stvarnom vremenu koristeći detekciju temeljenu na sondi, razvijen posebno za procese liofilizacije.Sadrži novi vrući enzim Hotstart Taq plus (DG), čija je aktivnost Taq enzima zatvorena na sobnoj temperaturi, učinkovito inhibirajući nespecifično pojačanje uzrokovano nespecifičnim žarenjem primera ili stvaranjem dimera primera pod uvjetima niske temperature, čime se poboljšava specifičnost reakcije pojačanja.Ovaj reagens koristi optimizirani qPCR specifični pufer i UNG/dUTP sustav protiv kontaminacije za postizanje brzog vrućeg pokretanja, uvelike poboljšavajući učinkovitost i osjetljivost qPCR reakcija.Može dobiti dobre standardne krivulje u širokom rasponu područja kvantifikacije i točno izvršiti kvantitaciju, učinkovito sprječavajući lažno pozitivno pojačanje uzrokovano zaostalim PCR proizvodima ili kontaminacijom aerosolom.Ovaj reagens je kompatibilan s većinom fluorescentnih kvantitativnih PCR instrumenata proizvođača kao što su Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad i Roche itd., i pokazuje dobru stabilnost u liofiliziranom obliku.
Sastav reagensa
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+besplatno) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lioprotektor (po izboru)
Uvjeti skladištenja
Dugotrajno skladištenje na -20 ℃;može se čuvati na 4 ℃ do 3 mjeseca.Prije upotrebe dobro promiješajte iizbjegavajte ponovno zamrzavanje i odmrzavanje.
Biciklistički protokol
| Postupak | Temp. | Vrijeme | Ciklus |
| Digestija | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Aktivacija polimeraze | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denaturirati | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 (prikaz, stručni). |
| Žarenje i ekstenzija | 56~64 ℃ | 20~60 s | 40-50 (prikaz, stručni). |
qPCR Liquid Reaction Sypriprema stabljike
|
Sastav |
Volumen 25µL |
Volumen 50µL |
Konačna koncentracija |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+besplatno) (DG) | 5 µL | 10 µL | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL | 0,9 µL | 4,5 mM |
| 4×lioprotektor1 | 6,25 µL | 12,5 µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Predložak DNK3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Do 25µL | Do 50µL | —— |
1. Konačna koncentracija od 0,2 μM za početnice obično daje dobre rezultate;kada je izvedba reakcije loša, po potrebi prilagodite koncentraciju primera unutar raspona od 0,2-1 μM.Koncentracija sonde obično se optimizira unutar raspona od 0,1-0,3 μM kroz eksperimente s gradijentom kako bi se pronašle optimalne kombinacije.
2. Broj kopija ciljnih gena sadržanih u različitim vrstama šablona varira;ako je potrebno, može se provesti gradijentno razrjeđivanje kako bi se odredila optimalna količina dodatka šablone.
3. Ovaj sustav se može liofilizirati;kada kupci koriste ovaj sustav bez zahtjeva za sušenje zamrzavanjem, 4×lioprotektor može se selektivno dodati; ako su potrebni proizvodi osušeni zamrzavanjem, tijekom validacije performansi proizvoda u fazi tekućih reagensa, mora se dodati 4×lioprotektor kako bi se osigurala konzistentnost s komponentama liofiliziranog sustava i učinci.
Kada se sustav koristid za sušenje smrzavanjem, pripremite sustav as sljedeće:
| Sastav | 25µL Reakcijski sustav |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+besplatno) (DG) | 5 µL |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µL |
| 4×lioprotektor | 6,25 µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Do 18~20µL |
* Ako su potrebni drugi sustavi za sušenje zamrzavanjem, posavjetujte se zasebno.
Postupak liofilizacijess
| Postupak | Temp. | Vrijeme | Stanje | Pritisak |
| Prethodno zamrzavanje | 4 ℃ | 30 min | Stani |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Hlađenje | ||
| -50 ℃ | 180 min | Stani | ||
| Primarno sušenje | -30℃ | 60 min | Grijanje |
Vrhunski vakuum |
| -30℃ | 70 min | Stani | ||
| Sekundarno sušenje | 25 ℃ | 60 min | Grijanje |
Vrhunski vakuum |
| 25 ℃ | 300 min | Stani |
2. Gore navedeni postupak liofilizacije služi samo kao referenca.Različite vrste proizvoda i različiti uređaji za sušenje zamrzavanjem imaju različite parametre, tako da se mogu izvršiti prilagodbe prema stvarnimuvjetima tijekom korištenja.
3. Različiti postupci liofilizacije mogu biti prikladni za različite veličine serija liofiliziranogproizvoda, tako da se mora provesti dostatna validacija testiranja kada se koristi za proizvodnju velikih razmjera.
Upute za uporabu liofilizatorad prah
1. Kratko centrifugirajte liofilizirani prašak;
2. Dodajte šablonu nukleinske kiseline u liofilizirani prah i dodajte vodu do 25 µL;
3. Dobro promiješajte centrifugiranjem i pustite na stroju.
Kontrola kvalitete:
1. Funkcionalno testiranje: osjetljivost, specifičnost, ponovljivost qPCR-a.
2. Nema aktivnosti egzogene nukleaze, nema kontaminacije egzogenom endo/egzonukleazom.
Tehničke informacije:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG koristi novi enzim za vruće pokretanje koji omogućuje brzo vruće pokretanje unutar 1~5 minuta;zahvaljujući posebnoj formulaciji pufera prikladan je za multipleks fluorescentne kvantitativne PCR reakcije.
2. Ima veću specifičnost koja značajno poboljšava osjetljivost detekcije kvantitativne PCR fluorescencije, normalizirajući krivulje pojačanja, vrijednost fluorescencije postiže očito poboljšanje na predlošcima niske koncentracije, prikladna kao visokoosjetljivi reagensi za kvantitativno detekciju PCR fluorescencije.
3. Za primere s nižom temperaturom žarenja ili fragmente duže od 200 bp, preporučuje se metoda u 3 koraka.
4. Učinkovitost iskorištavanja dUTP-a i osjetljivost na UNG enzim razlikuju se za različite ciljne gene, pa ako korištenje UNG sustava dovodi do smanjenja osjetljivosti detekcije, reakcijski sustav treba prilagoditi i optimizirati.Ako je potrebna tehnička podrška, obratite se našoj tvrtki.
5. Koristite namjenske prostore i pipete prije i poslije amplifikacije, nosite rukavice tijekom rada i često ih mijenjajte;nemojte otvarati reakcijsku epruvetu nakon završetka PCR-a kako biste smanjili kontaminaciju uzoraka PCR proizvodima.
