Komplet za genotipizaciju miša

Kataloški broj: HCR2021A

Ovaj proizvod je komplet dizajniran za brzu identifikaciju genotipova miševa, uključujući DNK sirovu ekstrakciju i PCR sustav pojačanja.Proizvod se može koristiti za PCR pojačanje izravno iz mišjeg repa, uha, nožnih prstiju i drugih tkiva nakon jednostavnog cijepanja puferom za lizu i proteinazom k.Nema digestije preko noći, ekstrakcije fenol-kloroformom ili pročišćavanja na stupcu, što je jednostavno i skraćuje vrijeme potrebno za pokuse.Proizvod je prikladan za amplificiranje ciljnih fragmenata do 2 kb i multipleksne PCR reakcije s do 3 para početnica.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix sadrži genetski modificiranu DNA polimerazu, Mg²⁺, dNTP i optimizirani puferski sustav za pružanje visoke učinkovitosti amplifikacije i tolerancije na inhibitore, tako da se PCR reakcije mogu provesti dodavanjem šablona i primera i rehidratacijom proizvoda do 1×.PCR produkt pojačan ovim proizvodom ima istaknutu bazu "A" na 3' kraju i može se koristiti izravno za TA kloniranje nakon pročišćavanja.

Komponente

Uvjeti skladištenja

Proizvode treba čuvati na -25~-15 ℃ 2 godine.Nakon odmrzavanja pufer za lizu može se pohraniti na 2~8 ℃ za kratkotrajnu višekratnu upotrebu i dobro promiješati prilikom upotrebe.

Primjena

Ovaj proizvod je prikladan za knockout analizu miševa, transgensku detekciju, genotipizaciju i tako dalje.

Značajke

1.Jednostavan rad: nema potrebe za izdvajanjem genomske DNA;

2.Široka primjena: pogodno za izravno pojačanje različitih mišjih tkiva.

upute

1.Oslobađanje genomske DNA

1) Priprema lizata

Lizat tkiva priprema se prema broju uzoraka miševa koji se liziraju (lizat tkiva treba pripremiti na licu mjesta u skladu s dozom i temeljito promiješati za upotrebu), a udio reagensa potrebnih za jedan uzorak je sljedeći:

2) Priprema uzorka i liza

Preporučena uporaba tkiva

Uzmite odgovarajuću količinu uzoraka tkiva miša u čiste epruvete za centrifugiranje, dodajte 200 μL lizata svježeg tkiva u svaku epruvetu za centrifugiranje, miješajte i protresite, zatim inkubirajte na 55 ℃ 30 minuta, a zatim zagrijavajte na 98 ℃ 3 minute.

3) Centrifugiranje

Dobro protresite lizat i centrifugirajte na 12 000 okretaja u minuti 5 minuta.Supernatant se može koristiti kao predložak za PCR amplifikaciju.Ako je predložak potreban za pohranjivanje, premjestite supernatant u drugu sterilnu epruvetu za centrifugiranje i pohranite na -20 ℃ 2 tjedna.

2.PCR amplifikacija

Uklonite 2×Mišje tkivo Direct PCR Mix s -20℃ i odmrznite na ledu, pomiješajte naopako i pripremite PCR reakcijski sustav prema sljedećoj tablici (radite na ledu):

Bilješka:

a) Dodana količina ne smije premašiti 1/10 sustava, a ako se doda previše, PCR pojačanje može biti inhibirano.

Preporučeni PCR uvjeti

Bilješka:

a) Temperatura žarenja: S obzirom na vrijednost Tm temeljnog premaza, preporuča se postaviti temperaturu žarenja na manju vrijednost Tm temeljnog premaza +3~5 ℃.

Uobičajeni problemi i rješenja

1.Nema ciljanih traka

1) Prekomjerni produkt lize.Odaberite najprikladniju količinu predloška, ​​obično ne više od 1/10 sustava;

2) Prevelik uzorak.Razrijedite lizat 10 puta, a zatim pojačajte ili smanjite veličinu uzorka i ponovno izvršite lizu;

3) Uzorci tkiva nisu svježi.Preporuča se koristiti svježe uzorke tkiva;

4) Loša kvaliteta temeljnog premaza.Upotrijebite genomsku DNK za umnožavanje kako biste potvrdili kvalitetu početnice i optimizirali dizajn početnice.

2.Nespecifična amplifikacija

1) Temperatura žarenja je preniska i broj ciklusa je previsok.Povećajte temperaturu žarenja i smanjite broj ciklusa;

2) Koncentracija predloška je previsoka.Smanjite količinu predloška ili razrijedite predložak 10 puta nakon amplifikacije;

3) Loša specifičnost primera.Optimizirajte dizajn temeljnog premaza.

Bilješke

1.Kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija između uzoraka, potrebno je pripremiti više alata za uzorkovanje, a površina alata može se očistiti 2% otopinom natrijeva hipoklorita ili sredstvom za čišćenje nukleinske kiseline nakon svakog uzorkovanja ako je potrebna ponovljena uporaba.

2.Preporuča se koristiti svježe mišje tkivo, a volumen uzorkovanja ne smije biti prevelik kako ne bi utjecao na rezultate pojačanja.

3.Pufer za lizu treba izbjegavati često smrzavanje-otapanje i može se čuvati na 2~8 ℃ za kratkotrajnu višekratnu upotrebu.Ako se čuva na niskim temperaturama, može doći do taloženja, te se mora potpuno otopiti prije upotrebe.

4.PCR mješavina treba izbjegavati često smrzavanje-otapanje i može se čuvati na 4 ℃ za kratkotrajnu ponovljenu upotrebu.

5.Ovaj je proizvod samo za znanstvena eksperimentalna istraživanja i ne smije se koristiti u kliničkoj dijagnozi ili liječenju.