Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Kataloški broj: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) je multiplex kvantitativni PCR komplet koji se temelji na RNA kao predlošku.Tijekom eksperimenta u istoj epruveti provedena je reverzna transkripcija i kvantitativni PCR, što je pojednostavilo rad eksperimenta i smanjilo rizik od kontaminacije.U ovom kompletu, prvi lanac cDNA učinkovito je sintetiziran reverznom transkriptazom otpornom na toplinu i kvantitativno pojačan HotStart Tag DNA polimerazom.Komplet uglavnom sadrži optimizirani MP pufer, mješavinu enzima itd. Otopina pufera već sadrži Mg2+i dNTP.Osim toga, dodani su čimbenici koji mogu učinkovito inhibirati nespecifičnu PCR amplifikaciju i poboljšati učinkovitost amplifikacije višestrukih qPCR reakcija, što može osigurati učinkovitost amplifikacije i provesti do višestruke reakcije amplifikacije.Dodan je dUTP/UDG sustav kako bi se učinkovito spriječio rizik od kontaminacije aerosolom.
Komponente
1. Međuspremnik
2. Mješavina enzima
Specifikacija
| Vrući početak | Ugrađen vrući start |
| Metoda detekcije | Detekcija temeljnom sondom |
| PCR metoda | RT-qPCR u jednom koraku |
| polimeraza | Taq DNA polimeraza |
| Vrsta uzorka | DNK |
Uvjeti skladištenja
Proizvod se isporučuje sa suhim ledom i može se čuvati na -25~-15 ℃ 1 godinu.Treba izbjegavati čestesmrzavanje-odmrzavanje.Preporučljivo je spremati odvojeno.
upute
1.Reakcija Sustav
| Komponente | Volumen (μL) | Konačna koncentracija |
| 2 × MP međuspremnik | 12.5 | 1× |
| Mješavina enzima | 1 | - |
| Mješavina primera/sonde (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Template RNA | 1-10 (prikaz, ostalo). | - |
| H2O bez RNaze | do 25 | - |
Bilješke:
Obavezno dobro promiješajte prije upotrebe, izbjegavajte prekomjerne mjehuriće uzrokovane jakim vibracijama.
a.Koncentracija primera: mješavina primera uključujući multiplex primer, ovisno o situaciji optimalna koncentracija primera može biti između 0,1 i 1,0 μM.
b.Koncentracija sonde: Mješavina sonde uključujući različitu fluorescentnu skupinu označavanja multipleks sonde, ovisno o situaciji optimalna koncentracija sonde može biti između 0,05 i 0,5 μM.
c.Razrjeđivanje uzorka: qPCR je vrlo osjetljiv i preporučuje se razrjeđivanje uzorka.Kontrolna vrijednost Ct je prikladna između 20 i 35.
d.Priprema sustava: Molimo pripremite na ultra čistom radnom stolu, pipetoru i reakcijskoj epruveti bez ostatka nukleaze;preporuča se uporaba glave pištolja s filterskim elementom.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2. Optimizirani biciklizamProtokol
| Ciklus korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Obrnuta transkripcija | 50 ℃a | 20 minuta | 1 |
| Početna-denaturacija | 95 ℃ | 5 minuta | 1 |
| Reakcija pojačanja | 95 ℃ | 15 sekundi |
40-45 (prikaz, stručni). |
| 60 ℃ b | 30 sekundi c |
Bilješke:
a.Obrnuta transkripcija: Temperatura može odabrati 42°C ili 50°C.
b.Reakcija amplifikacije: Temperatura se podešava prema vrijednosti Tm dizajniranih primera.
c.Prikupljanje fluorescentnog signala: Molimo postavite eksperimentalni postupak prema zahtjevima priručnika instrumenta.
Bilješke
Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost.
