2×HiF Taq plus Master Mix
Kataloški broj: HCR2014B
HIF Taq plus Master Mix (s bojom) je spremna za upotrebu 2× prethodno izmiješana otopina koja sadrži plus HIF DNA polimerazu, dNTP i optimizirani pufer.Dva monoklonska protutijela na sobnoj temperaturi koja inhibiraju aktivnost polimeraze i aktivnost 3′→5′egzonukleaze dodaju se u glavnu mješavinu za jednostavan i visoko specifičan Hot Start PCR.Faktor ekstenzije dodaje se u glavnu mješavinu kako bi enzim dobio kapacitet amplifikacije dugog fragmenta, duljina amplifikacije može biti do 13 kb, enzim ima aktivnost DNA polimeraze 5′→3′ i 3′→5′ aktivnost egzonukleaze, njegova je točnost 83 puta veća od Taq DNA polimeraze, što je 9 puta veća od obične DNA polimeraze.Pogodan je za pojačavanje složenih šablona, produkt pojačanja je tupi kraj.
2×HIF Taq plus Master Mix (s bojom) ima prednosti brze i jednostavne, visoke osjetljivosti, jake specifičnosti, dobre stabilnosti itd., reakcijski sustav treba dodati samo primere i predloške, a može se pojačati dvostrukim korak protokola, pojednostavljujući eksperimentalne korake i štedeći vrijeme.Ovaj proizvod sadrži indikatorske boje za elektroforezu, a PCR proizvodi mogu se koristiti izravno za elektroforezu.Osim toga, proizvod također sadrži specifično zaštitno sredstvo, tako da glavna mješavina može održati stabilnu aktivnost nakon ponovljenog zamrzavanja i odmrzavanja.
Uvjeti skladištenja
Proizvode treba čuvati na -25~-15 ℃ 1 godinu.
Tehnički podaci
| Specifikacija proizvoda | Majstorski miks |
| Koncentracija | 2× |
| Vrući početak | Ugrađen Hot Start |
| Prevjes | Tup |
| Brzina reakcije | Rapid |
| Veličina (konačni proizvod) | Do 13kb |
| Uvjeti za prijevoz | Suhi led |
| Vrsta proizvoda | PCR premiksi visoke vjernosti |
upute
1.PCR reakcijski sustav
| Komponente | Volumen (μL) |
| DNK predložak | Prikladan |
| Prednji početni (10 μmol/L) | 2.5 |
| Reverse Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | do 50 |
2.Preporučeno korištenje različitih predložaka
| Vrsta predloška | Pojačajte fragmente od 1 kb do 10 kb |
| Genomska DNK | 50 ng-200 ng |
| Plazmid ili virusna DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2,5 µL (nemojte prekoračiti 10% konačnog PCR reakcijskog volumena) |
3.Protokol pojačanja
1) Protokol u dva koraka (predložak složenosti)
| Ciklusni korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekundi | 30-35 (prikaz, stručni). |
| Proširenje | 68 ℃ | 30 s/kb | |
| Završno proširenje | 72 ℃ | 5 minuta | 1 |
2) Protokol u tri koraka (regularni protokol)
| Ciklusni korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturacija | 98 ℃ | 10 sekundi | 30-35 (prikaz, stručni). |
| Žarenje | 60 ℃ | 20 sek | |
| Proširenje | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Završno proširenje | 72 ℃ | 5 minuta | 1 |
3) Protokol gradijenta žarenja (predložak složenosti)
| Ciklusni korak | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna denaturacija | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturacija | 98 ℃ | 10 sek | 15 (1 ℃ smanjenje po ciklusu) |
| Gradijentno žarenje | 70-55 ℃ | 20 sek | |
| Proširenje | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Denaturacija | 98 ℃ | 10 sek |
20 |
| Žarenje | 55 ℃ | 20 sek | |
| Proširenje | 72 ℃ | 30 s/kb | |
| Završno proširenje | 72 ℃ | 5 minuta | 1 |
Značajke pod različitim protokolima pojačanja
| Protocol | Dva koraka | Trokorak | Gradijentno žarenje |
| spec. | brzo | srednji | usporiti |
| Specifičnost | visoka | srednji | visoka |
| PCR prinos | srednji | visoka | srednji |
| Stopa otkrivanja | visoka | srednji | visoka |
Bilješke
Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
