Reagens za otpuštanje uzorka
Reagens za oslobađanje uzorka je za scenarije molekularne POCT dijagnostike.Za dva sustava izravne amplifikacije LAMP i izravne amplifikacije PCR, nema potrebe za ekstrakcijom nukleinske kiseline.Sirovi lizat uzorka može se izravno pojačati, ciljni gen može se točno detektirati, vrijeme detekcije uzorka može se dodatno skratiti, što savršeno odgovara zahtjevima primjene molekularnog POCT-a.Pogodan je za nazalne briseve, briseve grla i druge vrste uzoraka.Obrađeni uzorci mogu se izravno koristiti za kvantitativnu fluorescentnu PCR ili LAMP detekciju u stvarnom vremenu, a isti rezultati kao konvencionalnim metodama ekstrakcije mogu se postići bez kompliciranih operacija ekstrakcije nukleinske kiseline.
Uvjeti skladištenja
Transportirati i čuvati na sobnoj temperaturi.
Kontrola kvalitete
Funkcionalna detekcija – kvantitativni qPCR: Sustav reagensa za oslobađanje uzorka od 800 μl pojačan je
s 1000 kopija novog pseudovirusa, jednim uzorkom brisa nosa, što rezultira sličnim krivuljama pojačanja iΔCt vrijednosti unutar ± 0,5 Ct.
Eksperimentalni postupakres
1. Uzmite 800 μl reagensa za otpuštanje uzorka i raširite otopinu za lizu u epruvetu za uzorkovanje od 1,5 mL
2. Uzmite bris nosa ili grla s brisom; Postupak uzimanja uzorka brisa nosa: uzmite sterilni bris i stavite ga u nosnice, polako pomaknite do dubine od oko 1,5 cm, lagano rotirajte 4 puta uz nosnu sluznicu dulje od 15 sekundi , zatim ponovite isti postupak na drugoj nosnoj šupljini s istim tupferom. Postupak uzimanja uzorka brisa grla: uzmite sterilni tupfer i nježno, brzo obrišite ždrijelne tonzile i stražnju stijenku ždrijela 3 puta.
3.Stavite štapić odmah u epruvetu za uzorkovanje.Glavu brisa treba rotirati i miješati u otopini za pohranjivanje najmanje 30 sekundi kako bi se osiguralo da je uzorak potpuno eluiran u epruveti za uzorkovanje.
4. Inkubacija na sobnoj temperaturi (20~ 25 ℃) 1 minutu, priprema pufera za lizu je završena.
5. Oba sustava RT-PCR i RT-LAMP od 25 μl bili su kompatibilni s količinom od 10 μl dodatka predloška za eksperimente detekcije.
Bilješke
1. Minimalna količina izravnog lizata uzorka koja odgovara jednom brisu može se prilagoditi na 400 μl, što se može prilagoditi prema potrebama testiranja.
2. Nakon što se uzorak obradi reagensom za otpuštanje uzorka, preporuča se provesti sljedeću fazu testa što je prije moguće, a interval čekanja poželjno je manji od 1 sata.
3. pH lizata uzorka je kiseo, a sustav za detekciju mora imati određeni pufer.Prikladan je za većinu PCR, RT-PCR i LAMP fluorescentne detekcije s pH puferom, ali nije prikladan za LAMP kolorimetrijsku detekciju bez pufera.
