Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) je jednolančani polipeptid koji sadrži 4 disulfidne veze s molekularnom težinom od oko 13,7 kDa.RNaza A je endoribonukleaza koja specifično razgrađuje jednolančanu RNK na C i U ostacima.Točnije, cijepanje prepoznaje fosfodiestersku vezu formiranu od 5'-riboze nukleotida i fosfatne skupine na 3'-ribozi susjednog pirimidinskog nukleotida, tako da se 2,3'-ciklički fosfati hidroliziraju u odgovarajuće 3 ′nukleozidne fosfate (npr. pG-pG-pC-pA-pG se cijepa pomoću RNaze A da bi se stvorio pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A je najaktivnija u cijepanju jednolančane RNK.Preporučena radna koncentracija je 1-100μG/mL, kompatibilna s različitim reakcijskim sustavima.Niska koncentracija soli (0-100 mM NaCl) može se koristiti za rezanje jednolančane RNA, dvolančane RNA i lanaca RNA formiranih hibridizacijom RNA-DNA.Međutim, pri visokoj koncentraciji soli (≥0,3 M), RNaza A specifično cijepa samo jednolančanu RNK.
RNaza A se najčešće koristi za uklanjanje RNK tijekom pripreme plazmidne DNA ili genomske DNA. Bilo da je DNaza aktivna ili ne tijekom procesa pripreme može lako utjecati na reakciju.Tradicionalna metoda kuhanja u vodenoj kupelji može se koristiti za inaktivaciju aktivnosti DNaze.Ovaj proizvod ne sadrži DNazu i proteazu, te nije potrebna toplinska obrada prije upotrebe.Osim toga, ovaj se proizvod također može koristiti u eksperimentima molekularne biologije kao što su analiza zaštite RNaze i analiza sekvence RNA.
Uvjeti skladištenja
Proizvod se može skladištiti na -25～-15℃, vrijedi 2 godine.
upute
Ovo je jedna od uobičajenih metoda za pripremu otopine za pohranu RNaze A.Može se pripremiti i podruge metode prema tradicionalnim metodama u laboratoriju ili referentnoj literaturi (kao što jeizravno otapanje u 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ili otopina Tris-NaCl)
1. Upotrijebite 10 mM natrijev acetat (pH 5,2) za pripremu 10 mg/mL otopine za pohranu RNaze A
2. Grijanje na 100 ℃ 15 min
3. Ohladite na sobnu temperaturu, dodajte 1/10 volumena 1 M Tris-HCl (pH 7,4), podesite pH na 7,4 (zana primjer, dodajte 500 ml 10 g/ml otopine za pohranu RNaze 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Podpakirano na -20 ℃ za skladištenje u zamrzivaču, koje može biti stabilno do 2 godine.
[Napomene]: Kada se otopina RNaze A kuha u neutralnim uvjetima, formirat će se talog RNaze;Kuhajte ga na nižem pH, a ako ima oborina, može se primijetiti, što može biti uzrokovano prisutnošću proteinskih nečistoća.Ako se nakon vrenja pronađe talog, nečistoće se mogu ukloniti centrifugiranjem velikom brzinom (13000 okretaja u minuti), a zatim se dodatno pakirati za skladištenje u zamrzivaču.
Informacije o Proizvodu
| Sinonimi | Ribonukleaza I;Ribonukleaza gušterače;Ribonukleaza 3'-pirimidnooligonukleotidohidrolaza;Rnaza A;Endoribonulceaza I |
| CAS br. | 9001-99-4 |
| Izgled | Bijeli liofilizirani prah |
| Molekularna težina | ~ 13,7 kDa (slijed aminokiselina) |
| Ph vrijednost | 7,6 (raspon aktivnosti 6-10) |
| Prikladna temperatura | 60 ℃ (raspon aktivnosti 15-70 ℃) |
| Sredstvo za aktiviranje | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Inhibitor Rnaze |
| Metoda inaktivacije | Ne može se inaktivirati zagrijavanjem, preporučuje se korištenje kolone centrifuge |
| Podrijetlo | Volovski |
| Topljivost | Topljiv u vodi (10mg/ml) |
| Gubitak na suhom | ≤5,0% |
| Aktivnost enzima | ≥60 Kunitz jedinica/mg |
| Izoelektrična točka | 9.6 |
Bilješke
Radi vaše sigurnosti i zdravlja, molimo da tijekom rada nosite laboratorijske kute i jednokratne rukavice.
