Univerzalni SYBR GREEN qPCR premix (plavi)

Kataloški broj: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (na bazi bojila) predotopina je za 2 x kvantitativno PCR pojačanje u stvarnom vremenu koju karakterizira visoka osjetljivost i specifičnost, plave je boje i ima učinak praćenja dodatka uzorka.Glavna komponenta Taq DNA polimeraza koristi vrući start antitijela za učinkovito inhibiranje nespecifičnog pojačanja zbog žarenja primera tijekom pripreme uzorka.U isto vrijeme, formula dodaje promotivne čimbenike za poboljšanje učinkovitosti amplifikacije PCR reakcije i izjednačavanje amplifikacije gena s različitim sadržajem GC (30 ~ 70%), tako da kvantitativni PCR može dobiti dobar linearni odnos u širokom kvantitativnom regija.Ovaj proizvod sadrži posebnu ROX pasivnu referentnu boju, koja je primjenjiva na većinu qPCR instrumenata.Nije potrebno podešavati koncentraciju ROX-a na različitim instrumentima.Potrebno je samo dodati primere i predloške kako bi se reakcijski sustav pripremio za amplificiranje.

Komponente

Universal Blue qPCR Master Mix

Uvjeti skladištenja

Proizvod se isporučuje s paketima leda i može se čuvati na -25 ℃ ~ -15 ℃ 18 mjeseci.Prilikom skladištenja ili pripreme reakcijskog sustava potrebno je izbjegavati jako svjetlosno zračenje.

Specifikacija

upute

1. Reakcijski sustav

[Napomena]: Prije upotrebe temeljito promiješajte kako biste izbjegli prekomjerne mjehuriće uslijed snažnog mućkanja.

a) Koncentracija primera: Konačna koncentracija primera je 0,2 μmol/L, a može se prema potrebi prilagoditi između 0,1 i 1,0 μmol/L.

b) Koncentracija uzorka: Ako je uzorak nerazrijeđena matična otopina cDNA, upotrijebljeni volumen ne smije premašiti 1/10 ukupnog volumena qPCR reakcije.

c) Razrjeđivanje uzorka: preporuča se razrijediti matičnu otopinu cDNA 5-10 puta.Optimalna količina dodanog predloška je bolja kada je vrijednost Ct dobivena pojačanjem 20-30 ciklusa.

d) Reakcijski sustav: Preporuča se koristiti 20 μL ili 50 μL kako bi se osigurala učinkovitost i ponovljivost amplifikacije ciljnog gena.

e) Priprema sustava: Molimo vas da se pripremite u super čistom stolu i koristite vrhove i reakcijske epruvete bez ostataka nukleaze;preporuča se koristiti vrhove s filtarskim ulošcima.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.

2.Reakcijski program

Standardni program

Brzi program

[Napomena]: Brzi program prikladan je za veliku većinu gena, a standardni programi mogu se isprobati za pojedinačne kompleksne gene sekundarne strukture.

a) Temperatura i vrijeme žarenja: molimo prilagodite prema duljini primera i ciljnog gena.

b) Prikupljanje fluorescentnog signala (★): Molimo postavite eksperimentalni postupak prema zahtjevima u uputama za uporabu instrumenta.

c) Krivulja taljenja: Zadani program instrumenta može se normalno koristiti.

3. Analiza rezultata 

Za kvantitativne pokuse bila su potrebna najmanje tri biološka ponavljanja.Nakon reakcije potrebno je potvrditi krivulju amplifikacije i krivulju taljenja.

3.1 Krivulja pojačanja:

Standardna krivulja pojačanja je u obliku slova S.Kvantitativna analiza je najtočnija kada vrijednost Ct padne između 20 i 30. Ako je vrijednost Ct manja od 10, potrebno je razrijediti šablonu i ponoviti test.Kada je vrijednost Ct između 30-35, potrebno je povećati koncentraciju uzorka ili volumen reakcijskog sustava, kako bi se poboljšala učinkovitost pojačanja i osigurala točnost analize rezultata.Kada je vrijednost Ct veća od 35, rezultati testa ne mogu kvantitativno analizirati ekspresiju gena, ali se mogu koristiti za kvalitativnu analizu.

3.2 Krivulja taljenja:

Jedan vrh krivulje taljenja pokazuje da je specifičnost reakcije dobra i da se može izvršiti kvantitativna analiza;ako krivulja taljenja pokazuje dvostruke ili višestruke vrhove, kvantitativna analiza se ne može provesti.Krivulja taljenja pokazuje dvostruke vrhove, a potrebno je procijeniti je li neciljani vrh početni dimer ili nespecifična amplifikacija elektroforezom na DNA agaroznom gelu.Ako se radi o dimeru primera, preporuča se smanjiti koncentraciju primera ili redizajnirati primere s visokom učinkovitošću pojačanja.Ako se radi o nespecifičnom pojačanju, povećajte temperaturu žarenja ili redizajnirajte primere sa specifičnošću.

Bilješke

Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost！

Ovaj proizvod je SAMO za istraživačku upotrebu！