Rnase A
Ribonukleaza A (RNaseA) je jednolančani polipeptid koji sadrži 4 disulfidne veze s molekularnom težinom od oko 13,7 kDa.RNaza A je endoribonukleaza koja specifično razgrađuje jednolančanu RNK na C i U ostacima.Točnije, cijepanje prepoznaje fosfodiestersku vezu formiranu od 5'-riboze nukleotida i fosfatne skupine na 3'-ribozi susjednog pirimidinskog nukleotida, tako da se 2,3'-ciklički fosfati hidroliziraju u odgovarajuće 3 'nukleozidni fosfati (npr. pG-pG-pC-pA-pG se cijepa pomoću RNaze A da bi se proizveli pG-pG-pCp i A-PG).RNaza A je najaktivnija u cijepanju jednolančane RNK.Preporučena radna koncentracija je 1- 100 μG/mL, kompatibilna s različitim reakcijskim sustavima.Niska koncentracija soli (0-100 mM NaCl) može se koristiti za rezanje jednolančane RNA, dvolančane RNA i lanaca RNA formiranih hibridizacijom RNA-DNA.
Međutim, pri visokoj koncentraciji soli (≥0,3 M), RNaza A specifično cijepa samo jednolančanu RNK.
RNaza A se najčešće koristi za uklanjanje RNA tijekom pripreme plazmidne DNA ili genomske DNA.Bez obzira je li DNaza aktivna tijekom procesa pripreme može lako utjecati na reakciju.Tradicionalna metoda kuhanja u vodenoj kupelji može se koristiti za inaktivaciju aktivnosti DNaze.Ovaj proizvod ne sadrži DNazu i proteazu, te nije potrebna toplinska obrada prije upotrebe.Osim toga, ovaj se proizvod također može koristiti u eksperimentima molekularne biologije kao što su analiza zaštite RNaze i analiza sekvence RNA.
Uvjeti skladištenja
Proizvod treba čuvati na -25 ℃ ~ - 15 ℃ 2 godine.
Tehnički podaci
| Izgled | Puder |
| Količina | 100 mg / 1 g |
| Vrsta proizvoda | RNaza A |
upute
Ovo je jedna od uobičajenih metoda za pripremu otopine za pohranu RNaze A.Može se i pripremitidrugim metodama prema tradicionalnim metodama u laboratoriju ili referentnoj literaturi (kao što jeizravno otapanje u 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ili otopina Tris-NaCl)
1. Upotrijebite 10 mM natrijevog acetata (pH 5,2) za pripremu 10 mg/mL otopine za pohranu RNaze A.
2. Grijanje na 100 ℃ 15 min.
3. Ohladite na sobnu temperaturu, dodajte 1/10 volumena 1 M Tris-HCl (pH 7,4), podesite pH na 7,4 (zana primjer, dodajte 500 mL 10 mg/mL otopine za pohranu RNaze 1 M Tris-HCl, pH 7,4).
4. Podpakirano na -20 ℃ za skladištenje u zamrzivaču, koje može biti stabilno do 2 godine.
[Bilješke]:
Kada se otopina RNaze A kuha u neutralnim uvjetima, formirat će se talog RNaze;Kuhajte ga na nižem pH, a ako ima oborina, može se primijetiti, što može biti uzrokovano prisutnošću proteinskih nečistoća.Ako se nakon vrenja pronađe talog, nečistoće se mogu ukloniti centrifugiranjem pri velikoj brzini (13000 okretaja u minuti), a zatim pakirati za skladištenje u zamrzivaču.
Bilješke
Nosite potrebnu OZO, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost.
