One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Kataloški broj: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix je za kvantifikaciju fluorescencije na temelju SYBR Green I boje.Korištenjem početnica specifičnih za gen, reverzna transkripcija i qPCR reakcije dovršavaju se u jednoj epruveti, eliminirajući potrebu za ponovnim otvaranjem čepa i pipetiranjem, uvelike poboljšavajući učinkovitost analize i smanjujući rizik od kontaminacije.Za uzorke RNA, komplet koristi reverznu transkriptazu otpornu na toplinu za učinkovitu sintezu cDNA i HotStart Taq DNA polimerazu za kvantitativno pojačanje.Pod optimiziranim puferskim sustavom, osjetljivost kompleta može biti čak do 0,1 pg za visoko izražene mete i čak 1 pg za umjereno izražene mete.Komplet je prikladan za umnožavanje i kvantifikaciju uzoraka DNK.Omogućuje osjetljivu detekciju i kvantifikaciju nukleinskih kiselina iz različitih biljnih i životinjskih uzoraka, stanica i mikroorganizama.
Komponente
| No | Ime | Volumen | Volumen |
| 1 | Napredni međuspremnik | 250 μL | 2×1,25 ml |
| 2 | Napredna mješavina enzima | 20 μL | 200 μL |
| 3 | Bez RNaze H2O | 250 μL | 2×1,25 ml |
Uvjeti skladištenja
Ovaj proizvod treba čuvati na -25~-15 ℃ zaštićen od svjetlosti 1 godinu.
upute
1. Konfiguracija sustava za reakcijud
| Komponente | Volumen (μL) | Volumen (μL) | Konačna koncentracija |
| Napredni međuspremnik | 12.5 | 25 | 1× |
| Napredna mješavina enzima | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0,5 | 1 | 0,2 μmol/L |
| Ploča RNAb | X | X | - |
| Bez RNaze H2Oc | do 25 | do 50 | - |
Bilješke:
1) a.TKonačna koncentracija primera bila je 0,2 μmol/L, koja se također mogla prilagoditi između 0,1 i 1 μmol/L prema potrebi.
2) b.Reagens je iznimno osjetljiv, s ukupnom RNK u rasponu od 1 pg-1 μg, a testiranje ljudskih uzoraka pokazalo je optimalan unos od 1 pg-100 ng, kontrolirajući ukupnu vrijednost Ct u rasponu od 15-30 prema potrebi.
3) c.Preporuča se koristiti 20 μL ili 50 μL kako bi se osigurala valjanost i ponovljivost amplifikacije ciljnog gena.
4) d.Molimo pripremite se u ultra-čistom stolu i koristite vrhove i reakcijske epruvete bez ostataka nukleaze;preporučuju se nastavci s filterskim ulošcima.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2.Reakcijski program
| Ciklusni korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Obrnuta transkripcija | 50 ℃a | 6 minuta | 1 |
| Početna denaturacija | 95 ℃ | 5 minuta | 1 |
| Reakcija pojačanja | 95 ℃ | 15 sek | 40 |
| 60 ℃b | 30 sek | ||
| Faza krivulje taljenja | Zadane postavke instrumenta | 1 | |
Bilješke:
1) a.Temperatura obrnute transkripcije može se odabrati između 50-55°C prema eksperimentalnim potrebama.Za uzorke DNK, proces obrnute transkripcije može se izostaviti.
2) b.U posebnim slučajevima temperatura žarenja/ekstenzije može se prilagoditi prema vrijednosti Tm temeljnog premaza, preporučuje se 60°C.
Bilješke
1. Ovaj proizvod je samo za istraživačku upotrebu.
2. Radi vaše sigurnosti radite u laboratorijskim kutama i jednokratnim rukavicama.
