Inhibitor Rnaze (bez glicerola)
Inhibitor mišje RNaze je rekombinantni inhibitor mišje RNaze eksprimiran i pročišćen iz E.coli.Veže se na RNazu A, B ili C u omjeru 1:1 putem nekovalentne veze, čime inhibira aktivnost triju enzima i štiti RNA od razgradnje.Međutim, nije učinkovit protiv RNaze 1, RNaze T1, S1 nukleaze, RNaze H ili RNaze iz Aspergillus.Inhibitor mišje RNaze testiran je pomoću RT-PCR, RT-qPCR i IVT mRNA, te je bio kompatibilan s raznim komercijalnim reverznim transkriptazama, DNA polimerazama i RNA polimerazama.
U usporedbi s ljudskim inhibitorima RNaze, inhibitor mišje RNaze ne sadrži dva cisteina koji su vrlo osjetljivi na oksidaciju koja uzrokuje inaktivaciju inhibitora.To ga čini stabilnim pri niskim koncentracijama DTT (manje od 1 mM).Ova značajka ga čini prikladnim za upotrebu u reakcijama gdje su visoke koncentracije DTT nepovoljne za reakciju (npr. RT-PCR u stvarnom vremenu).
Aprimjena
Ovaj se proizvod može naširoko koristiti u bilo kojem eksperimentu gdje je moguća interferencija RNaze kako bi se izbjegla degradacija RNK, kao što su:
1. Sinteza cDNA prvog lanca, RT-PCR, RT-qPCR, itd.;
2. Zaštititi RNA od razgradnje u in vitro transkripciji/translaciji (npr. replikacija virusa in vitro);
3. Inhibicija aktivnosti RNAze tijekom izolacije i pročišćavanja RNA.
Uvjeti skladištenja
Čuvati na -25～-15℃;
Ciklusi smrzavanja i odmrzavanja ≤ 5 puta;
Vrijedi 1 godinu.
Definicija jedinice
Jedna jedinica definirana je kao količina inhibitora RNaze potrebna za inhibiciju aktivnosti 5 ng RNaze A za 50%.
Molekularna težina
Inhibitor RNaze (bez glicerola) je protein od 50 kDa.
Kontrola kvalitete
egzonukleaza Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima s 1 μg λ-Hind III digestirane DNA tijekom 16 sati na 37°C nije rezultirala vidljivom razgradnjom DNA što je utvrđeno gel elektroforezom.
Aktivnost endonukleaze:
Inkubacija 40 U enzima s 1 μg λ DNA tijekom 16 sati na 37°C nije rezultirala detektabilnom razgradnjom DNA što je utvrđeno gel elektroforezom.
Rezanje Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima s 1 µg pBR322 tijekom 16 sati na 37 ℃ nije rezultirala detektabilnom degradacijom DNA što je utvrđeno elektroforezom u gelu.
RNaza Aktivnost:
Inkubacija 40 U enzima s 1,6 μg MS2 RNA tijekom 4 sata na 37 ℃ nije rezultirala mjerljivom razgradnjom RNA što je utvrđeno gel elektroforezom.
E.coli DNK:
40 U enzima otkriva TaqMan qPCR.E.coli DNA je ≤ 0,1 pg/40U.
Notes
1. Nemojte snažno tresti ili miješati kako biste spriječili inaktivaciju enzima.
2. Inhibitor RNaze je aktivan na temperaturama u rasponu od 25 ℃ do 55 ℃ i deaktivira se na ≥65 ℃.
3. Aktivnost RNaze H, RNaze 1 i RNaze T1 nije inhibirana.
4. Raspon pH za inhibiciju aktivnosti RNaze je širok (aktivan pri pH 5-9), pokazujući maksimalnu aktivnost pri pH 7-8.
