Bst 2.0 DNA polimeraza (bez glicerola)
Bst DNK polimeraza V2 izvedena je iz Bacillus stearothermophilus DNK polimeraze I, koja ima aktivnost 5′→3′ DNK polimeraze i jaku aktivnost zamjene lanca, ali nema aktivnost 5′→3′ egzonukleaze.Bst DNA polimeraza V2 idealno je prikladna za pomicanje niti, izotermno pojačanje LAMP (izotermno pojačanje posredovano petljom) i brzo sekvenciranje.
Komponente
| komponenta | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolimeraza V2 (bez glicerola) (8U/μL) | 0,2 mL | 1 mL | 10 mL |
| 10×HC Bst V2 međuspremnik | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 3×10 ml |
| MgSO4(100 mM) | 1,5 mL | 2×1,5 mL | 2×10 mL |
Prijave
1. LAMP izotermno pojačanje
2. Reakcija premještanja jednog lanca DNA
3. Visoko sekvenciranje GC gena
4.DNK sekvenciranje nanogramske razine.
Uvjet skladištenja
Prijevoz ispod 0°C i skladištenje na -25°C~-15°C.
Definicija jedinice
Jedna jedinica definirana je kao količina enzima koja inkorporira 25 nmol dNTP-a u materijal netopljiv u kiselini u 30 minuta na 65°C.
Kontrola kvalitete
1.Test čistoće proteina (SDS-PAGE):Čistoća Bst DNA polimeraze V2 je ≥99% određena SDS-PAGE analizom pomoću detekcije Coomassie Blue.
2.Aktivnost egzonukleaze:Inkubacija 50 µL reakcije koja sadrži najmanje 8 U Bst DNA polimeraze V2 s 1 µg λ -Hind Ⅲ digestirane DNA tijekom 16 sati na 37 ℃ ne rezultira vidljivom razgradnjom kako je utvrđeno.
3.Nickase aktivnost:Inkubacija 50 µL reakcije koja sadrži najmanje 8 U Bst DNA polimeraze V2 s 1 µg pBR322 DNA tijekom 16 sati na 37°C ne rezultira vidljivom razgradnjom kako je utvrđeno.
4.Aktivnost RNaze:Inkubacija 50 µL reakcije koja sadrži najmanje 8 U Bst DNA polimeraze V2 s 1,6 μg MS2 RNA tijekom 16 sati na 37°C ne rezultira mjerljivom razgradnjom kako je utvrđeno.
5.DNK E. coli:120 U Bst DNA polimeraze V2 pregledava se na prisutnost genomske DNA E. coli pomoću TaqMan qPCR s početnicama specifičnim za lokus 16S rRNA E. coli.Kontaminacija genomske DNA E. coli je ≤1 kopija.
Reakcija LAMPE
| Komponente | 25μL |
| 10×HC Bst V2 međuspremnik | 2,5 μL |
| MgSO4 (100 mM) | 1,5 μL |
| dNTP (10 mM svaki) | 3,5 μL |
| SYTO™ 16 zelena (25×)a | 1,0 μL |
| Mješavina temeljnog premazab | 6 μL |
| Bst DNA polimeraza V2 (bez glicerola) (8 U/uL) | 1 μL |
| Predložak | × μL |
| ddH₂O | Do 25 μL |
Bilješke:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Prema eksperimentalnim potrebama, druge boje se mogu koristiti kao zamjene;
2) b.Mješavina temeljnog premaza: dobivena miješanjem 20 µM FIP, 20 µM BIP, 2,5 µM F3, 2,5 µM B3, 5 µM LF, 5 µM LB i drugih volumena.
Reakcija i stanje
1 × pufer HC Bst V2, temperatura inkubacije je između 60°C i 65°C.
Inaktivacija toplinom
80 °C, 20 min
