Enzimi UDG/UNG
UDG (uracil DNA glikozilaza) može katalizirati hidrolizu N-glikozidne veze između uracil baze i šećerno-fosfatne okosnice u ssDNA i dsDNA.Može jednostavno kontrolirati zagađenje aerosolom i prikladan je za uobičajene sustave molekularne biologije kao što su PCR, qPCR, RT-qPCR i LAMP.
Tehnički podaci
| Domaćin izraza | Rekombinantna E. coli s genom uracil DNA glikozilaze |
| Molekularna težina | 24. 8kDa |
| Čistoća | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Inaktivacija toplinom | 95℃, 5~10 min |
| Definicija jedinice | Jedna jedinica (U) definirana je kao količina enzima koja je potrebna za katalizaciju hidrolize l μg dsDNA koja sadrži dU u 30 minuta na 25 ℃. |
Skladištenje
Proizvod treba čuvati na -25℃~-15°C dvije godine.
upute
1.Priprema PCR reakcijske smjese prema sljedećem sustavu
| Komponente | Volumen (μL) | Konačna koncentracija |
| 10×PCR pufer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/L |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/luženje) | 1 | 0,2 mmol/izluživanje |
| Predložak DNK | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/L |
| Taq DNA polimeraza (5 U/μL) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Uracil DNA glikozilaza (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Do 50 | - |
Bilješka: Prema eksperimentalnim zahtjevima, konačna koncentracija dUTP može se podesiti između 0,2-0,6 mmol/L, a 0,2 mmol/L dTTP može se dodati selektivno.
2.Postupak pojačanja
| Ciklusni korak | Temperatura | Vrijeme | Ciklusi |
| degradacija predloška koji sadrži dU | 25 ℃ | 10 minuta | 1 |
| UDG aktivacija, početna denaturacija šablona | 95 ℃ | 5~10 minuta | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 10 sek |
30-35 (prikaz, stručni). |
| Žarenje | 60 ℃ | 20 sek | |
| Proširenje | 72 ℃ | 30 sekundi/kb | |
| Završno proširenje | 72 ℃ | 5 minuta | 1 |
Bilješka: Vrijeme reakcije na 25°C može se prilagoditi unutar 5-10 minuta prema eksperimentalnim zahtjevima.
Bilješke
1.UDG je aktivan u većini PCR reakcijskih pufera.
2.Enzime treba čuvati u posudi za led ili u ledenoj kupelji kada se koriste, a odmah nakon upotrebe treba ih čuvati na -20°C.
3.Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
