RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ovaj proizvod sadrži reakcijski pufer, mješavinu RT-enzima (Bst DNA polimeraza i reverzna transkriptaza otporna na toplinu), liofilizirane zaštitne tvari i komponente kromogene boje.Za upotrebu, samo koristite pufer, reakcijski enzim i primer se miješaju i dodaju u predložak;dodavanje liofiliziranog zaštitnika može biti ravno.Spojen je na liofilizator i liofiliziran, a pri korištenju su dodavani samo primeri i predlošci.Ovaj komplet pruža brzu, jasnu vizualnu detekciju pojačanja, pri čemu je negativna reakcija označena crvenom bojom, a pozitivna reakcija označena je promjenom u žuto.
komponenta
| komponenta | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Pufer za pojačanje posredovan petljom (s bojom) | 0,96 mL | 4,80 mL×2 | 9,60 mL × 10 |
| Mješavina RT-enzima | 270 μL | 2,70 ml | 2,70 mL × 10 |
| Liofilizirani zaštitnik | 0,96 mL × 2 | 9,60 mL×2 | 9,60 mL × 20 |
Prijave
Za izotermno pojačanje DNA ili RNA.
Uvjeti skladištenja
Prevozi se sa suhim ledom, čuva na -25~ -15 ℃.Izbjegavajte često zamrzavanje-otapanje, proizvod vrijedi 12 mjeseci.
Protokol
1.Otopite reakcijski pufer koji ćete koristiti na sobnoj temperaturi.Nakratko promiješajte ili preokrenite epruvete nekoliko puta da se temeljito promiješaju, zatim centrifugirajte da skupite tekućinu na dno epruvete.
2.Priprema reakcijskog sustava.Ovaj reagens može se pripremiti u dva reakcijska sustava, tekućoj reakcijskoj smjesi i liofiliziranoj mješavini sustava.
1) Pripremite tekuću reakcijsku smjesu
| komponenta | Volumen |
| Pufer za pojačanje posredovan petljom (s bojom) | 10 μL |
| Mješavina RT-enzima | 2,8 μL |
| 10 × mješavina temeljnog premazaa | 5 μL |
| Predlošci DNA/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
2) Mješavina sustava za liofilizaciju
① Pripremite liofiliziranu smjesu
| komponenta | Volumen |
| Pufer za pojačanje posredovan petljom (s bojom) | 10 μL |
| Liofilizirani zaštitnik | 20 μL |
| Mješavina RT-enzima | 2,8 μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
② Liofilizacija: Pripremljena smjesa je liofilizirana u sustavu od 50 μL
③ Pripremite reakcijsku smjesu
| komponenta | Volumen |
| Liofilizirana mješavina | 1 komad |
| 10 × mješavina temeljnog premazaa | 5 μL |
| Predlošci DNA/RNA b | × μL |
| Voda bez nukleaza | Do 50 μL |
Bilješke:
1) a.10×Primer Mix: 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.DEPC (topljiv u vodi) preporučuje se za templ nukleinske kiseline.
1.Inkubirajte na 65°C 30-45 minuta, što se može odgovarajuće produžiti u skladu s promjenom boje. Vrijeme reakcije.
2.Sudeći golim okom, žuto je bilo pozitivno, a crveno negativno.
Bilješke
1.Sol se može pojaviti na dnu puferske cijevi, kratko promiješajte ili preokrenite cijevi nekoliko puta kako biste temeljito promiješali na sobnoj temperaturi.
2.Reakcijska temperatura može se optimizirati između 62 ℃ i 68 ℃ prema stanju temeljnih premaza.
3.Zapakirani reagensi ne smiju biti izloženi zraku dulje vrijeme.
4.Reakcija promjene boje u crveno i žuto ovisi o pH promjeni reakcijskog sustava, nemojte koristiti otopinu za skladištenje Tris nukleinske kiseline koja sadrži, preporučuje se upotreba ddH2O pohranjena nukleinska kiselina;
5.Eksperiment treba standardizirati, uključujući pripremu reakcijskog sustava, liofilizaciju i obradu uzorka i proces dodavanja uzorka;
6.Kako bi se izbjegla kontaminacija, preporuča se pripremiti reakcijski sustav u ultra-čistom stolu, u drugim. Dodajte šablone u napu prostorije kako biste izbjegli lažne pozitivne smetnje.
