alkalna fosfataza (ALP)
Opis
Alkalna fosfataza je izvedena iz rekombinantnog soja E. coli koji nosi gen TAB5.Enzim katalizira defosforilaciju 5´ i 3´ krajeva DNA i RNA fosfomonoestera.Također, hidrolizira ribozu, kao i deoksiribonukleozid trifosfate (NTP i dNTP).TAB5 alkalna fosfataza djeluje na 5´ stršeće, 5´ udubljene i tupe krajeve.Fosfataza se može koristiti u mnogim aplikacijama molekularne biologije, kao što je kloniranje ili označavanje krajeva sonde za uklanjanje fosforiliranih krajeva DNA ili RNA.U eksperimentima kloniranja, defosforilacija sprječava lineariziranu plazmidnu DNA od samoligacije.Također može razgraditi neinkorporirane dNTP-ove u PCR reakcijama kako bi se pripremio predložak za sekvenciranje DNA.Enzim se potpuno i nepovratno inaktivira zagrijavanjem na 70°C tijekom 5 minuta, čime uklanjanje fosfataze prije podvezivanja ili krajnjeg označavanja postaje nepotrebno
Korištenje
1. Alkalna fosfataza povezana s proteinima (antitijela, streptavidin itd.) može specifično identificirati ciljne molekule i može se koristiti u ELISA, WB i histokemijskoj detekciji;
2. Alkalna fosfataza se može koristiti za defosforizaciju 5'-terminala DNA ili RNA kako bi se spriječilo samopovezivanje;
3. Gore navedena defosforilirana DNA ili RNA može se obilježiti radioaktivno obilježenim fosfatima (preko T4 polinukleotidne kinaze)
Kemijska struktura
Specifikacija
| Ispitni predmeti | Tehnički podaci |
| Aktivnost enzima | 5U/μL |
| Aktivnost endonukleaze | Nije otkriven |
| Aktivnost egzonukleaze | Nije otkriven |
| Nicking Aktivnost | Nije otkriven |
| Aktivnost RNaze | Nije otkriven |
| E.coli DNK | ≤1 kopija/5U |
| Endotoksin | LAL-test, ≤10EU/mg |
| Čistoća | ≥95% |
Prijevoz i skladištenje
Prijevoz:Ambijentalni
Skladištenje:Čuvati na 2-8°C
Preporučeno ponovno testiranjeŽivot:2 godine
