Multiplex qPCR Probe Premix
Kataloški broj: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (na bazi boje) predotopina je za 2 × kvantitativno PCR pojačanje u stvarnom vremenu koju karakterizira visoka osjetljivost i specifičnost, plave je boje i ima učinak dodavanja uzorka.Ovaj proizvod je 2× Mix prethodno pomiješani reagens koji omogućuje do četiri fluorescentne kvantitativne PCR reakcije u jednoj reakcijskoj jažici.Ovaj proizvod sadrži metodu genetski modificiranih antitijela za Taq enzim s vrućim startom, uvelike poboljšavajući osjetljivost i specifičnost pojačanja.U isto vrijeme, ovaj proizvod je duboko optimizirao multi-reakcijski pufer, koji može poboljšati učinkovitost pojačanja reakcije i promicati učinkovito pojačanje šablona niske koncentracije.Ovaj se proizvod može koristiti za genotipizaciju i multipleks kvantitativnu analizu.
Specifikacija
| Vrući početak | Ugrađen vrući start |
| Metoda detekcije | Detekcija temeljnom sondom |
| PCR metoda | qPCR |
| polimeraza | Taq DNA polimeraza |
| Vrsta uzorka | DNK |
Uvjeti skladištenja
Proizvod se isporučuje sa suhim ledom i može se čuvati na -25 ~ -15 ℃ 2 godine.
upute
1. ReakcijaSustav
| Komponente | Volumen (μL) | Konačna koncentracija |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Mješavina temeljnog premaza (10 μmol/L) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/L |
| Mješavina sonde (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox referentna boja | 0,5 | 1× |
| Šablon DNA/cDNA | 1-10 (prikaz, ostalo). | - |
| ddH2O | do 25 | - |
Bilješke:Prije upotrebe temeljito promiješajte kako biste izbjegli prekomjerne mjehuriće uslijed snažnog mućkanja.
a.Koncentracija primera: Mješavina primera sadrži više parova primera, obično svaki primer u konačnoj koncentraciji od 0,2 μmol/L i može se prema potrebi prilagoditi između 0,1 i 0,5 μmol/L.
b.Koncentracija sonde: Probe Mix sadrži više sondi s različitim signalima fluorescencije, a koncentracija svake sonde može se prilagoditi između 50 i 250 nmol/L prema specifičnoj situaciji.
1.Rox referenca boje: Koristi se na instrumentu za pojačavanje PCR u stvarnom vremenu kao što je Applied Biosystems za ispravljanje pogreške fluorescentnog signala generiranog između jažica;ovaj proizvod ne sadrži referencu Rox boje.Cas#10200 preporučuje se ako je potrebno.
2.Razrjeđivanje predloška: qPCR je vrlo osjetljiv i preporučuje se razrijediti predložak za upotrebu.Ako je predložak temeljna otopina cDNA, volumen predloška ne smije premašiti 1/10 ukupnog volumena.
3.Reakcijski sustav: preporučuje se 25 μL, 30 μL ili 50 μL kako bi se osigurala učinkovitost i ponovljivost amplifikacije ciljnog gena.
4.Priprema sustava: Molimo pripremite se u super čistom stolu i koristite vrhove i reakcijske epruvete bez ostataka nukleaze;preporuča se koristiti vrhove s filtarskim ulošcima.Izbjegavajte unakrsnu kontaminaciju i kontaminaciju aerosolom.
2.Reakcijski program
| Ciklusni korak | Temp. | Vrijeme | Ciklusi |
| Početna-denaturacija | 95 ℃ | 5 minuta | 1 |
| Denaturacija | 95 ℃ | 15 sekundi | 45 |
| Žarenje/proširenje | 60 ℃ | 30 sekundi |
Bilješke:
1.Žarenje/proširenje: Temperatura i vrijeme mogu se prikladno prilagoditi prema projektiranoj vrijednosti Tm temeljnog premaza.
2.Prikupljanje fluorescentnog signala: Vrijeme prikupljanja fluorescentnog signala potrebno za različite instrumente za detekciju qPCR je različito, postavite prema minimalnom vremenskom ograničenju.Vrijeme nekoliko uobičajenih instrumenata postavljeno je na sljedeći način:
20 sekundi: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sekunda: Applied Biosystems 7300
32 sekunde: Applied Biosystems 7500
Bilješke
Nosite potrebnu osobnu zaštitnu opremu, poput laboratorijske kute i rukavica, kako biste osigurali svoje zdravlje i sigurnost!
