CHO HCP ELISA set
U ovoj se analizi koristi jednostupanjska imunosorbentna ELISA metoda.Uzorci koji sadrže CHOK1 HCP istovremeno reagiraju s HRP-obilježenim kozjim anti-CHOK1 antitijelom i anti-CHOK1 antitijelom obloženim na ELISA ploči, na kraju formirajući sendvič kompleks antitijela čvrste faze-HCP-obilježenog antitijela.Nevezano antigen-antitijelo može se ukloniti pranjem ELISA ploče.TMB supstrat se dodaje u jažicu za dovoljnu reakciju.Razvijanje boje se zaustavlja nakon dodavanja otopine za zaustavljanje, a OD ili vrijednost apsorbancije reakcijske otopine pri 450/650 nm očitava se čitačem mikropločica.Vrijednost OD ili vrijednost apsorbancije proporcionalna je sadržaju HCP u otopini.Iz toga se koncentracija HCP u otopini može izračunati prema standardnoj krivulji.
Primjena
Ovaj pribor se koristi za kvantitativno otkrivanje sadržaja ostataka proteina stanica domaćina CHOK1 u uzorcima.
Ckomponente
| S N | komponenta | Koncentracija | Uvjeti skladištenja |
| 1 | CHOK1 HCP standard | 0,5 mg/mL | ≤–20℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0,5 mg/mL | ≤–20℃, zaštititi od svjetlosti |
| 3 | TMB | NA | 2-8℃, zaštititi od svjetlosti |
| 4 | 20 × PBST 0,05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Stop rješenje | NA | RT |
| 6 | Zatvarači mikropločica | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Ploče s predpremazom visoke adsorpcije | NA | 2-8 ℃ |
Potrebna oprema
| Potrošni materijal/oprema | Proizvodnja | Katalog |
| Čitač mikropločica | Molekularni uređaji | Spectra Max M5, M5e ili ekvivalent |
| Termomikser | Eppendorf | Eppendorf/5355, ili ekvivalent |
| Vortex miješalica | IKA | MS3 Digital ili ekvivalent |
Skladištenje i stabilnost
1.Transport na -25~-15°C.
2.Uvjeti skladištenja prikazani su u tablici 1;komponente 1-2 pohranjuju se na ≤–20°C, 5-6 se pohranjuju na sobnoj temperaturi, 3、4、7、8 pohranjuju se na 2-8 ℃;rok valjanosti je 12 mjeseci.
Parametri proizvoda
1.Osjetljivost: 1ng/mL
2.Raspon detekcije: 3- 100 ng/mL
3.Preciznost: CV unutar testa≤ 10%, CV između testa≤ 15%
4.HCP pokrivenost: >80%
5.Specifičnost: Ovaj pribor je univerzalan jer specifično reagira s CHOK1 HCP neovisno o procesu pročišćavanja.
Priprema reagensa
1.PBST 0,05%
Uzeti 15 ml 20×PBST 0,05%, razrijeđenog u ddH2O, i dopunjen do 300 ml.
2.1,0% BSA
Uzmite 1g BSA iz bočice i razrijedite u 100 ml PBST 0,05%, dobro promiješajte dok se potpuno ne otopi i čuvajte na 2-8°C.Pripremljeni pufer za razrjeđivanje vrijedi 7 dana.Preporuča se pripremati po potrebi.
3.Otopina za detekciju 2μg/mL
Uzmite 48 μL 0,5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP i razrijedite u 11,952 μL 1% BSA kako biste dobili konačnu koncentraciju od 2 μg/mL otopine za detekciju.
4.QC i priprema CHOK1 HCP standarda
| Cijev Ne. | Izvornik | Koncentracija | Volumen | 1% BSA | ukupni volumen | Konačna |
| A | Standard | 0,5 mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10.000 |
| B | A | 10.000 | 50 | 450 | 500 | 1000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Tablica: Priprema QC-a i standarda
Postupak ispitivanja
1.Pripremite reagense kako je navedeno u gornjem odjeljku “Priprema reagensa”.
2.Uzmite 50 μL standarda, uzoraka i QC (pogledajte tablicu 3) u svaku jažicu, zatim dodajte 100 μL otopine za detekciju (2 μg/mL);Pokrijte ploču sredstvom za brtvljenje i postavite ELISA ploču na termomikser.Inkubirajte na 500 okretaja u minuti, 25±3 ℃ 2 sata.
3.Okrenite mikroploču u sudoper i bacite otopinu za oblaganje.Otpipetirajte 300 μL PBST 0,05% u svaku jažicu da isperete ELISA ploču i odbacite otopinu te ponovite ispiranje 3 puta.Okrenite ploču na čisti papirnati ručnik i osušite.
4.Dodajte 100 μL TMB supstrata (vidi tablicu 1) u svaku jažicu, zatvorite ELISA ploču i inkubirajte u mraku na 25±3 ℃ 15 minuta.
5.Otpipetirajte 100 μL stop otopine u svaku jažicu.
6.Izmjerite apsorbanciju na valnoj duljini od 450/650 nm čitačem mikropločica.
7.Analizirajte podatke pomoću SoftMaxa ili ekvivalentnog softvera.Iscrtajte standardnu krivulju pomoću modela logističke regresije s četiri parametra.
Primjer standardne krivulje
NAPOMENA: Ako koncentracija HCP-a u uzorku premašuje gornju granicu standardne krivulje, potrebno ga je pravilno razrijediti puferom za razrjeđivanje prije testiranja.
BILJEŠKE
Zaustavna otopina je 2M sumporna kiselina, molimo rukujte pažljivo kako biste izbjegli prskanje!
