BspQI
BspQI se može rekombinantno eksprimirati u E. coli koja može prepoznati određena mjesta i proizvodi se pod
BspQI, restrikcijska endonukleaza IIs restrikcijske endonukleaze, izvedena je iz rekombinantnog soja E. coli koji nosi klonirani i modificirani gen BspQI iz Bacillus sphaericus.Može prepoznati određena mjesta, a redoslijed prepoznavanja i mjesta cijepanja su sljedeći:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Značajke proizvoda
1. Visoka aktivnost, Brza probava;
2. Niska aktivnost zvijezda, osigurava precizno rezanje poput "skalpela";
3. Bez BSA i bez životinjskog podrijetla;
Osjetljivost na metilaciju
Dam metilacija:Nije osjetljiv;
Dcm metilacija:Nije osjetljiv;
CpG metilacija:Nije osjetljiv;
Uvjeti skladištenja
Proizvod treba slati na ≤ 0℃;Čuvati na -25 ~ - 15 ℃ uvjetima.
Međuspremnik za pohranu
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitol, 500 µg/ml rekombinantnog albumina, 0,1 % Tritiona X-100 i 50 % glicerola (pH 7,0 @ 25 °C).
Definicija jedinice
Jedna jedinica definirana je kao količina enzima potrebna za probavu 1 µg interne kontrole DNA u 1 satu na 50°C u ukupnom reakcijskom volumenu od 50 µL.
Kontrola kvalitete
Test čistoće proteina (SDS-PAGE):Čistoća BspQI bila je ≥95% određena SDS-PAGE analizom.
RNaza:10U BspQI s 1,6 μg MS2 RNA tijekom 4 sata na 50 ℃ ne dovodi do razgradnje što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.
Nespecifična aktivnost DNaze:10U BspQI s 1 μg λ DNA na 50 ℃ tijekom 16 sati, u usporedbi s 50 ℃ tijekom 1 sata, ne daje višak DNA kako je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.
Podvezivanje i rezanje:Nakon digestije 1 μg λDNA s 10U BspQI, fragmenti DNA mogu se povezati s T4 DNA ligazom na 16ºC.I ti povezani fragmenti mogu se ponovno rezati s BspQI.
E coli DNK: TaqMan qPCR detekcija specifična za E. coli 16s rDNA pokazala je da je ostatak genoma E. coli ≤ 0,1 pg/ul.
Ostatak proteina domaćina:≤ 50 ppm
Bakterijski Endotoksin: LAL-test, prema izdanju Kineske farmakopeje IV iz 2020., metoda ispitivanja granice gela, opće pravilo (1143).Sadržaj bakterijskog endotoksina trebao bi biti ≤10 EU/mg.
Reakcijski sustav i uvjeti
| komponenta | Volumen |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μL |
| DNK | 1 μg |
| 10 x BspQ I međuspremnik | 5 μL |
| dd H2O | Do 50 μL |
Uvjeti reakcije: 50 ℃, 1 ~ 16 h.
Inaktivacija toplinom: 80°C 20 min.
Preporučeni reakcijski sustav i uvjeti mogu pružiti relativno dobar učinak probave enzima, što je samo za referencu, pogledajte eksperimentalne rezultate za detalje.
Primjena proizvoda
Digestija restrikcijskom endonukleazom, brzo kloniranje.
Bilješke
1. Volumen enzima ≤ 1/10 reakcijskog volumena.
2. Zvjezdana aktivnost može se pojaviti kada je koncentracija glicerola veća od 5%.
3. Do aktivnosti cijepanja može doći kada je supstrat ispod preporučenog omjera.
