Ultra Nukleaza
UltraNuclease je genetski inženjerizirana dendonuklaeza izvedena iz Serratia marcescens, koja je sposobna razgraditi DNA ili RNA, bilo dvolančane ili jednolančane, linearne ili kružne pod širokim rasponom uvjeta, potpuno razgraditi nukleinske kiseline u 5'-monofosfatne oligonukleotide s duljinom od 3-5 baza .Nakon modifikacije genetskim inženjeringom, proizvod je fermentiran, eksprimiran i pročišćen u Escherichia coli (E. coli), što smanjuje viskoznost staničnih supernatanta i staničnih lizata u znanstvenim istraživanjima, ali također poboljšava učinkovitost pročišćavanja i funkcionalna istraživanja proteina.Također se može koristiti u genskoj terapiji, pročišćavanju virusa, proizvodnji cjepiva, farmaceutskoj industriji proteina i polisaharida kao reagens za uklanjanje ostataka nukleinske kiseline domaćina.
Značajke proizvoda
| CAS br. | 9025-65-4 |
| EC br. | |
| Molekularna težina | 30 kDa |
| Izoelektrična točka | 6.85 |
| Čistoća proteina | ≥99%（SDS-PAGE & SEC-HPLC） |
| Specifična aktivnost | ≥1.1×106U/mg |
| Optimalna temperatura | 37°C |
| Optimalni pH | 8.0 |
| Aktivnost proteaze | negativan |
| Bioopterećenje | <10CFU/100,000U |
| Ostatak proteina stanice domaćina | ≤10 ppm |
| Teški metal | ≤10 ppm |
| Bakterijski endotoksin | <0,25 EU/1000 U |
| Međuspremnik za pohranu | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50% glicerola |
Uvjeti skladištenja
≤0°C transport；-25~-15°C Skladištenje，2 godine valjanosti (izbjegavati smrzavanje-odmrzavanje).
Definicija jedinice
Količina enzima korištena za promjenu vrijednosti apsorpcije △A260 za 1,0 unutar 30 minuta na 37 °C, pH 8,0, što je ekvivalentno probavljenoj DNK sperme lososa od 37 μg rezanjem na oligonukleotide, definirana je kao aktivna jedinica (U).
Kontrola kvalitete
Ostatak proteina stanice domaćina: ELISA set
•Proteaza Ostaci: 250KU/mL UltraNuclease reagira sa supstratom 60 minuta, nije otkrivena nikakva aktivnost.
•Bakterijski endotoksin: LAL-Test, Farmakopeja Narodne Republike Kine svezak 4 (izdanje 2020.) metoda ispitivanja granice gela.Opća pravila (1143).
•Bioopterećenje: Farmakopeja Narodne Republike Kine, svezak 4 (izdanje 2020.)— Općenito
Pravila za ispitivanje sterilnosti (1101), nacionalni standard PRC-a, GB 4789.2-2016.
•Teški metal:ICP-AES, HJ776-2015.
Operacija
Aktivnost UltraNuclease bila je značajno inhibirana kada je koncentracija SDS bila iznad 0,1% ili EDTA
koncentracija je bila preko 1 mM. Surfaktant Triton X-100, Tween 20 i Tween 80 nisu imali učinka na nukleazu
svojstva kada je koncentracija bila ispod 1,5%.
| Operacija | Optimalan rad | Valjana operacija |
| Temperatura | 37 ℃ | 0-45 ℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0- 11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100 mM | >100 mM |
| 2-merkaptoetanol | 0-100 mM | >100 mM |
| Jednovalentni metalni ion (Na+, K+ itd.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100 mM |
Upotreba i doziranje
• Uklonite egzogenu nukleinsku kiselinu iz proizvoda cjepiva, smanjite rizik od rezidualne toksičnosti nukleinske kiseline i poboljšajte sigurnost proizvoda.
• Smanjite viskoznost tekućine za hranu uzrokovanu nukleinskom kiselinom, skratite vrijeme obrade i povećajte prinos proteina.
• Uklonite nukleinsku kiselinu koja je omotala česticu (virus, inkluzijska tijela, itd.), što je pogodno
do oslobađanja i pročišćavanja čestice.
| Eksperimentalni tip | Proizvodnja proteina | Virus, cjepivo | Stanični lijekovi |
| Broj stanica | 1 g mokre težine ćelije (resuspendiran s 10 ml pufera) | 1l fermentacije tekući supernatant | 1L kulture |
| Minimalna doza | 250U | 100U | 100U |
| Preporučeno doziranje | 2500U | 25000U | 5000U |
• Tretman nukleazom može poboljšati rezoluciju i oporavak uzorka za kromatografiju na stupcu, elektroforezu i blotting analizu.
• U genskoj terapiji, nukleinska kiselina se uklanja kako bi se dobili pročišćeni adeno-povezani virusi.
