Temperaturno osjetljivi UNG
Temperaturno osjetljivi UNG (TS-UNG) je dobiven rekombinantnom ekspresijom u E. coli.Enzim katalizira otpuštanje slobodnog uracila iz jednolančane i dvolančane DNA koja sadrži uracil i neaktivan je protiv RNA.U usporedbi s konvencionalnim UNG enzimom podrijetlom gena E. coli, TS-UNG enzim ima veću aktivnost na niskim temperaturama (20 ℃ ~ 37 ℃) i temperaturno je osjetljiv i lako se inaktivira (50 ℃), izbjegavajući degradaciju pojačanja koje sadrži dUTP proizvoda na sobnoj temperaturi zaostalom aktivnošću koja može ostati nakon inaktivacije konvencionalnog UNG enzima.Stoga enzim TS-UNG nije prikladan samo za PCR reakciju sprječavanja kontaminacije, već se također dobro slaže s RT-PCR programom amplifikacije i može se koristiti u RT-PCR reakciji sprječavanja kontaminacije.
Preporučena primjena
Sprječavanje kontaminacije pojačanje
Uvjet skladištenja
-20°C za dugotrajno skladištenje, treba dobro promiješati prije upotrebe, izbjegavati često zamrzavanje-otapanje.
Međuspremnik za pohranu
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilizator, 50% glicerol.
Definicija jedinice
Količina enzima potrebna za razgradnju 1 µg jednolančane DNA koja sadrži dU baze u 1 satu na 37°C je 1 jedinica aktivnosti (U).
Kontrola kvalitete
1.SDS-PAGE elektroforetska čistoća veća od 98%
2.Aktivnost razgradnje, kontrola od serije do serije, stabilnost
3.Nema aktivnosti egzogene nukleaze, nema egzogene endonukleaze ili kontaminacije egzonukleazom.
upute
| Komponente | Volumen (μL) | Konačna koncentracija |
| 10 × PCR pufer (bez dNTP, Mg²+besplatno) | 5 | 1× |
| dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (zamijeni dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Mješavina temeljnog premazaa | 2 | 1× |
| Predložak | - | <1μg/reakcija |
| ddH₂O | do 50 | - |
Napomena: a: Ako se koristi za qPCR/qRT-PCR, fluorescentnu sondu treba dodati u reakcijski sustav.Obično konačna koncentracija primera od 0,2 μM može dati dobre rezultate;kada je učinak reakcije loš, koncentracija primera može se podesiti u rasponu od 0,2-1 μM.Obično je koncentracija sonde optimizirana u rasponu od 0,1-0,3 μM.Eksperimenti s gradijentom koncentracije mogu se provesti kako bi se pronašla najbolja kombinacija primera i sonde.
Bilješke
1.Optimalna temperatura reakcije TS-UNG enzima je relativno niska i može se optimizirati u rasponu od 20 ℃ ~ 37 ℃, doziranje enzima i vrijeme reakcije mogu se optimizirati u rasponu od 0,1 ~ 0,5 U, 5 ~ 10 min;a enzim se može inaktivirati u procesu reverzne transkripcije.
2.Prikladan je za PCR i RT-PCR kako bi se spriječila kontaminacija.
3.Izbjegavajte često smrzavanje-otapanje i ne izlažite ga velikim temperaturnim oscilacijama.
4.Različiti geni koje treba amplificirati imaju različitu učinkovitost iskorištavanja dUTP-a i osjetljivost na UNG enzim, stoga, ako uporaba UNG sustava dovodi do smanjenja osjetljivosti detekcije, reakcijski sustav treba prilagoditi i optimizirati, ako trebate tehničku podršku, obratite se naša tvrtka.
