DNaza I
DNaza I (deoksiribonukleaza I) je endodeoksiribonukleaza koja može probaviti jednolančanu ili dvolančanu DNK.Prepoznaje i cijepa fosfodiesterske veze kako bi proizveo monodeoksinukleotide ili jednolančane ili dvolančane oligodeoksinukleotide s fosfatnom skupinom na 5'-terminalu i hidroksilnom na 3'-terminalu.Aktivnost DNaze I ovisi o Ca2+ i može se aktivirati dvovalentnim metalnim ionima kao što su Mn2+ i Zn2+.5 mM Ca2+ štiti enzim od hidrolize.U prisutnosti Mg2+, enzim bi mogao nasumično prepoznati i odcijepiti bilo koje mjesto na bilo kojem lancu DNA.U prisutnosti Mn2+, dvostruki lanci DNA mogu se istovremeno prepoznati i cijepati na gotovo istom mjestu kako bi se formirali ravni DNA fragmenti ili ljepljivi krajnji fragmenti DNA s 1-2 nukleotida koji strše.
Svojstvo proizvoda
DNaza I goveđe gušterače eksprimirana je u ekspresijskom sustavu kvasca i pročišćena.
Ckomponente
| komponenta | Volumen | |||
| 0,1 KU | 1KU | 5KU | 50KU | |
| DNaza I, bez RNaze | 20 μL | 200 μL | 1 mL | 10 ml |
| 10×DNase I pufer | 1 mL | 1 mL | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Prijevoz i skladištenje
1. Stabilnost skladištenja: – 15℃~-25℃ za skladištenje;
2. Stabilnost transporta: transport ispod leda;
3. Isporučuje se u: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50% glicerol, pH 7,6 na 25 ℃.
Definicija jedinice
Jedna jedinica se definira kao količina enzima koja će potpuno razgraditi 1 µg pBR322 DNA u 10 minuta na 37°C.
Kontrola kvalitete
RNaza:5U DNaze I s 1,6 μg MS2 RNA tijekom 4 sata na 37 ℃ ne dovodi do razgradnje što je utvrđeno elektroforezom u agaroznom gelu.
Bakterijski Endotoksin:LAL-test, prema izdanju Kineske farmakopeje IV iz 2020., metoda ispitivanja granice gela, opće pravilo (1143).Sadržaj bakterijskog endotoksina trebao bi biti ≤10 EU/mg.
Upute za korištenje
1. Pripremite reakcijsku otopinu u epruveti bez RNaze prema dolje navedenim omjerima:
| komponenta | Volumen |
| RNA | X μg |
| 10 × DNaza I pufer | 1 μL |
| DNaza I, bez RNaze (5U/μL) | 1 U po μg RNA |
| ddH2O | Do 10 μL |
2,37 ℃ 15 minuta;
3. Dodajte terminacijski pufer da zaustavite reakciju i zagrijavajte na 65 ℃ 10 minuta da deaktivirate DNazu I. Uzorak se može izravno upotrijebiti za sljedeći eksperiment transkripcije.
Bilješke
1. Koristite 1U DNazu I po μg RNA ili 1U DNazu I za manje od 1 μg RNA.
2. EDTA treba dodati do konačne koncentracije od 5 mM kako bi se zaštitila RNA od razgradnje tijekom inaktivacije enzima.
